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        Tuner(DE3) pLysS 感受態

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         產品簡介

        Tuner(DE3)菌株是 BL21 菌株的 lacZY 基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株,此突變導致 IPTG 以均一 速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞,

        產生更加嚴格、均一的濃度依賴。將具有氯霉素抗性的 pLysS 質粒導入 Tuner(DE3)細胞中即是 Tuner(DE3) pLysS,其中 pLysS 表達 T7

        溶菌酶,可與 T7 RNA 聚合酶結合抑制其轉錄活性,進而降低目標蛋白的本底表達水平,但不干擾 IPTG 誘導的表達, 因而非常適合毒性

        蛋白的原核表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體 DE3 區 (DE3 區含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶),可同時表達 T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA

        聚合酶,可用于 pET 系列,pGEX, pMAL 等質粒的蛋白表達。Tuner(DE3)pLysS 感受態細胞由特殊工藝制作,pUC18 質粒檢測轉化效 率

        達 107 cfu/μg DNA。

        產品組成組分

        CC96181-01 CC96181-02 CC96181-03 Tuner(DE3)pLysS 感受態細胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL。

        定制 基因型

        F - ompT hsdSB (rB - mB - ) gal dcm lacY1 λ(DE3) pLysS CamR

        存儲條件

        -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

        質量控制

        無外源質粒 DNA 殘留; 化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

        使用方法

        1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

        2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;

        3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;

        4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;

        5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。

        注意事項

        1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用;

        2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;

        3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;

        4. 為確保最高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

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