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        Rosetta-gami B (DE3)pLysS 感受態

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         產品簡介

        Rosetta-gami B 系列菌株來源于 Origami B 系列菌株,是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列菌株和 Origami 系列菌株的優點。

        該系列菌株攜帶有 trxB 和 gor 基因突變,可以高效表達含二硫鍵的蛋白; 此外,由于能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有

        的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有 密碼子的 tRNA,因而能夠提高真核蛋白在大腸桿菌中的表達水平。該菌

        株含有氯霉素、卡那和四 環素抗性,所以無法轉化含這些抗性的質粒,但是可以用于氨芐抗性和壯觀霉素抗性質粒的原核 表

        達。Rosetta-gami B(DE3) pLysS 可高效表達 T7 RNA 聚合酶,因而適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動子系列載體。含有的

        pLysSRARE 質?梢员磉_ T7 溶菌酶來有效降低目的基因的本底表達水 平。pLysSRARE 質粒的起始復制位點是 p15 Origin,

        其可以與 pUC-及 pBR322-衍生的質;ハ喙 存。經 pUC18 質粒轉化檢測,Rosetta-gami B (DE3) pLysS 感受態細胞的轉化

        效率可達 107 cfu/μg DNA 以上。

        產品組成組分

        CC96122-01 CC96122-02 CC96122-03 Rosetta-gami B (DE3) pLysS 化學感受態細胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL

        定制基因型:

        F – ompT hsdSB (rB – mB – ) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, TetR)

        存儲條件

        -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

        質量控制

        除 pLysSRARE 質粒外,無外源質粒 DNA 殘留; 化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

        使用方法

        1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;

        2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;

        3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰浴中靜置 2-3 min;

        4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;

        5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。

        注意事項

        1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用;

        2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;

        3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;

        4. 為確保最高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

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