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        Rosetta-gami B 感受態

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         產品簡介

        Rosetta-gami B 系列菌株來源于 Origami B 系列菌株,是集合了 BL21 系列,Rosetta 系列菌株和 Origami 系列菌株的優點,極大的增強了

        細胞內二硫鍵的形成和含有在大腸桿菌中稀有密碼子的真 核細胞蛋白的表達能力。Rosetta-gami B系列菌株是來源于 Origami B系列菌株,

        攜帶有TrxB和Gor 基因突變,提高含二硫鍵正確折疊 蛋白的高效表達。本菌株含有 pRARE 質粒,能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的

        AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有密碼子的 tRNA 外,增 加了真核細胞的在大腸桿菌中的蛋白表達水平。在 thioredoxin

        reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同時含有突變,這使得該菌株能夠更加高效的在細胞質內生成二硫鍵,有助于含二

        硫 鍵蛋白的活性蛋白形成。TrxB 和 Gor 基因突變使得質粒能夠分別具有卡那和四環素抗性,所以本 菌株無法用于卡那和四環素抗性質

        粒的蛋白表達。Rosetta-gami B感受態細胞來源于含有 BL21系列 菌株中的 lacZY 基因突變,能夠通過 IPTG 高效控制目的基因的表達。

        Rosetta-gami B 感受態細胞能 夠用于氨芐抗性和壯觀霉素抗性質粒的原核表達。Rosetta-gami B 感受態細胞經特殊工藝制作, pUC18

        質粒檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。

        產品組成組分

        CC96146-01 CC96146-02 CC96146-03 Rosetta-gami B 感受態細胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL。定制 基因型F - ompT hsdSB (rB -mB - )

        gal dcm lacY1 ahpC gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR , KanR , TetR )。

        存儲條件

        -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

        質量控制

        無外源質粒 DNA 殘留; 化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

        使用方法

        1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

        2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;

        3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;

        4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;

        5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。

        注意事項

        1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用;

        2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;

        3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;

        4. 為確保最高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

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