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        Rosetta-gami 2 (DE3)pLacl 感受態

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         產品簡介

        Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的優點;Rosetta-gami 2 (DE3)系列菌株是來源于 Origami 2 系列菌株,在其

        染色體上帶有溶源性的 λDE3,可表達 T7 RNA 聚合酶。由于該菌株不含卡納抗性,適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動子系列載體。該菌株攜帶 有 trxB

        和 gor 基因突變,從而提高了含二硫鍵正確折疊蛋白的表達效率;同時帶有的 pLacIRARE2 質粒(攜帶氯霉素抗性),除了能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主

        菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有密碼子的 tRNA 外,還提供了第七個稀有密碼子 CGG 的 tRNA,因而能夠增 強真核細胞蛋白在

        大腸桿菌中的表達水平。此外,LacI 蛋白也可以抑制 T7lac 啟動子在無誘導劑時 的本底表達。經 pUC18 質粒轉化檢測,Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 感受

        態細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg DNA。

        產品組成組分

        CC96120-01 CC96120-02 CC96120-03 Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 化學感受態細胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL。

        定制基因型

        Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLacIRARE2 (CamR, StrR, TetR)。

        存儲條件

        -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

        質量控制

        除 pLacIRARE2 外,無外源質粒 DNA 殘留; 化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

        使用方法

        1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

        2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30min;

        3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;

        4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;

        5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。

        注意事項

        1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用;

        2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;

        3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;

        4. 為確保最高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

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