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產品簡介
Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的優點；Rosetta-gami 2 (DE3)系列菌株是來源于 Origami 2 系列菌株，在其
染色體上帶有溶源性的 λDE3，可表達 T7 RNA 聚合酶。由于該菌株不含卡納抗性，適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動子系列載體。該菌株攜帶 有 trxB
和 gor 基因突變，從而提高了含二硫鍵正確折疊蛋白的表達效率；同時帶有的 pLacIRARE2 質粒（攜帶氯霉素抗性），除了能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主
菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有密碼子的 tRNA 外，還提供了第七個稀有密碼子 CGG 的 tRNA，因而能夠增 強真核細胞蛋白在
大腸桿菌中的表達水平。此外，LacI 蛋白也可以抑制 T7lac 啟動子在無誘導劑時 的本底表達。經 pUC18 質粒轉化檢測，Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 感受
態細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg DNA。
產品組成組分
CC96120-01 CC96120-02 CC96120-03 Rosetta-gami 2 (DE3) pLacI 化學感受態細胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL。
定制基因型
Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLacIRARE2 (CamR, StrR, TetR)。
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除 pLacIRARE2 外，無外源質粒 DNA 殘留； 化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保最高轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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