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        Rosetta 2 (DE3)pLysS 感受態

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         產品簡介

        Rosetta-gami 2 系列菌株是集合了 Rosetta 2 系列菌株和 Origami 2 系列菌株的優點;Rosetta-gami 2 (DE3)系列菌株是來源于 Origami 2,帶有溶源性

        的 λDE3,可表達 T7 RNA 聚合酶。該菌株攜帶有 trxB 和 gor 基因突變,從而提高了含二硫鍵正確折疊蛋白的表達效率。該菌株中帶有的 pLysSRARE2

        質粒(攜帶氯霉素抗性),除了能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA六個稀有密碼子的 tRNA外,還提供了第

        七個稀有密碼子 CGG 的 tRNA, 因而能夠提高真核蛋白在大腸桿菌中的表達水平。Rosetta-gami 2(DE3)感受態細胞具有四環素抗性, 不含卡納抗性,

        適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動子系列載體。pLysSRARE2 質?杀磉_ T7 溶菌 酶,可以有效降低目的基因的基礎表達水平。經 pUC18 質粒轉化

        檢測,Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS 感受態細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg DNA 以上。

        產品組成組分

        CC96121-01 CC96121-02 CC96121-03 Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS 化學感受態細胞 10 × 100 μL 100 ×100 μL。

        定制基因型

        Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)

        存儲條件

        -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

         質量控制

        除 pLysSRARE2 質粒外,無外源質粒 DNA 殘留; 化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

        使用方法

        1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

        2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;

        3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;

        4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;

        5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。

        注意事項

        1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用;

        2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;

        3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;

        4. 為確保最高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

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