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        Rosetta (DE3)pLysS 感受態

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         產品簡介

        Rosetta 系列菌株來源于 BL21 系列宿主菌,該系列菌株含有原本在大腸桿菌中稀少的真核細胞密碼 子,增加了真核細胞的蛋白表達水平。

        Rosetta(DE3)pLysS 來源于 Rosetta(DE3),菌株能夠提供 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 稀有密碼子的 tRNA。Rosetta(DE3)pLysS

        載體通過提供稀有 密碼子,使得該宿主菌相對于其他大腸桿菌,能夠提供更加“通用”的蛋白質表達,從而提升目的蛋 白表達水平。DE3 是溶

        源性的 λDE3, 所以帶有 T7 RNA 聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于 pET 系 列載體,及其他 T7 啟動子系列載體。含有 pLysSRARE2 質粒,

        能夠產生 T7 溶菌酶,可以有效降低 目的基因的基礎表達水平,該質粒具有氯霉素抗性。pLysSRARE2質粒的起始復制位點是p15 Origin, 這使

        得該質粒能夠和 pUC-及 pBR322-衍生的質;ハ喙泊。經 pUC18 質粒轉化檢測, Rosetta(DE3)pLysS 感受態細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg

        DNA 以上。

        產品組成組分

        CC96112-01 CC96112-02 CC96112-03 Rosetta(DE3)pLysS 化學感受態細胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL

        定制基因型

        F - ompT hsdSB (rB -mB - ) gal dcm (DE3) pLysSRARE2 (CamR)

        存儲條件

        -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

        質量控制

        除 pLysSRARE2 外,無外源質粒 DNA 殘留; 化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

        使用方法

        1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化

        2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;

        3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90 s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;

        4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養基(室溫或37 ℃預熱),然后置于37 ℃搖床復壯45 min;

        5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。

        注意事項

        1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用;

        2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;

        3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;

        4. 為確保最高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

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