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        ArcticExpress(DE3) pRARE2 感受態

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         產品簡介:

        ArcticExpress (DE3) pRARE2 來源于 ArcticExpress (DE3),將具有氯霉素抗性的 pRARE2 質粒導入 ArcticExpress (DE3)細胞中即是 ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株染 色體 DNA 中整合了 λ 噬菌體 DE3 區,使得 ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株可同時表達 T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶,廣泛用于 pET 系列,pGEX,pMAL 等質粒的蛋白表達。 ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株具有四環素,慶大霉素,氯霉素抗性;endA1 突變有利于質粒 DNA 的穩定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使 ArcticExpress (DE3) pRARE2 可以表達適應低溫的伴侶 蛋白 Cpn10 和 Cpn60(來自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10 和 Cpn60 伴侶蛋白在 4-12 ℃表現 出較高活性,在 ArcticExpress(DE3) pRARE2 細胞中表達時,可降低重組蛋白包涵體的形成,增加 可溶重組蛋白的表達量及生物活性,比傳統的原核表達伴侶蛋白 GroEL、GroES 等具有更加優異的 促融能力。同時,pRARE2 質?裳a充大腸桿菌缺乏的 7 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 和 CGG)對應的 tRNA,提高外源基因的表達水平。吐露港生產的 ArcticExpress (DE3) pRARE2 感受態細胞經特殊工藝制作,pUC18 質粒檢測轉化效率達 108cfu/μg DNA。

        產品組成組分:

        CC96184-01 CC96184-02 CC96184-03 ArcticExpress(DE3)pRARE2 感受態細胞 10 × 100 μL 100 × 100 μL。

        定制基因型:

        E. coli B F– ompT hsdS (rB – mB – ) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)。

        存儲條件:

        -80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

        質量控制:

        除pRARE2 外,無外源質粒 DNA 殘留; 化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

        使用方法:

        1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;

        2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;

        3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;

        4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;

        5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。

        注意事項:

        1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用;

        2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10; 

        3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;

        4. 為確保最高轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

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